處理培養(yǎng)細(xì)胞

從 19 世紀(jì)末開始，科學(xué)家們就從各種生物體（例如人類、小鼠、豬、雞和植物）中分離出自然環(huán)境中的細(xì)胞，并將它們置于體外（拉丁語“玻璃中"）中。 ） 文化。實驗細(xì)胞是從許多不同的組織和器官中提取的，例如腸、腎、血液、腦、乳腺和許多癌癥實體。

體外培養(yǎng)細(xì)胞的目的是模擬培養(yǎng)箱內(nèi)的體內(nèi)（拉丁語“活體中"）條件，或者在進行活細(xì)胞成像時甚至在顯微鏡下模擬體內(nèi)條件。每種細(xì)胞類型都需要定制培養(yǎng)參數(shù)，以實現(xiàn)最佳的健康、活力和生長。對于所有實驗，保持條件無菌、均質(zhì)和可重復(fù)至關(guān)重要，以獲得可比較的結(jié)果。

傳代、接種和冷凍細(xì)胞

為了保持細(xì)胞處于增殖狀態(tài)，并防止它們達(dá)到過度匯合，以規(guī)定的時間間隔進行傳代非常重要。必須定期進行細(xì)胞傳代，以保持細(xì)胞處于培養(yǎng)狀態(tài)、實現(xiàn)體積放大或在實驗開始時接種它們。該過程也稱為細(xì)胞分裂或傳代培養(yǎng)。除其他因素外，傳代的最佳時間取決于增殖率以及所需的細(xì)胞數(shù)量。每種細(xì)胞類型的確切裂解方案都是的。一般來說，貼壁細(xì)胞使用蛋白水解酶（主要是胰蛋白酶/EDTA）從基質(zhì)上分離，這對于消化其蛋白質(zhì)附著鍵是必需的。接下來，將細(xì)胞勻漿、計數(shù)并接種到新容器中，從而將傳代次數(shù)增加一倍。

傳代/傳代=將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)皿和生長培養(yǎng)基中

一些細(xì)胞系，例如 HeLa 或其他缺乏細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的癌細(xì)胞，可以無限傳代而不喪失分裂能力（永生細(xì)胞系）。此外，某些胚胎細(xì)胞類型或多能干細(xì)胞也是如此。其他細(xì)胞，特別是原代細(xì)胞（例如，從成體器官中分離的細(xì)胞），在幾次傳代后將失去這種能力，因為它們要么經(jīng)歷衰老，要么分化，要么死亡。因此，使用具有相似傳代數(shù)的細(xì)胞進行可重復(fù)的實驗非常重要。

對于細(xì)胞接種，需要選擇適合各自細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)容器和實驗裝置的密度。如果密度太低，細(xì)胞可能會由于生長因子釋放到培養(yǎng)基中不足而停止生長。缺乏細(xì)胞間和細(xì)胞間基質(zhì)通訊的單個細(xì)胞甚至可能因一種特殊形式的程序性細(xì)胞死亡（稱為失巢凋亡）而死亡。如果接種密度太高，細(xì)胞可能在很短的時間內(nèi)就已經(jīng)達(dá)到過度匯合。這會導(dǎo)致增殖受損和細(xì)胞與基質(zhì)分離，從而導(dǎo)致實驗條件不可重現(xiàn)。

標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞類型可在 –80°C 下短期保存，或在液氮中長期保存。為此，需要對細(xì)胞進行胰蛋白酶化、均質(zhì)化和離心，然后使用特殊的冷凍介質(zhì)進行冷凍。為了對抗此過程引起的細(xì)胞應(yīng)激，建議使用具有高回收率的冷凍介質(zhì)。此外，解凍過程必須快速進行（例如，在37°C的水浴中），然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中并將其放入培養(yǎng)箱中以創(chuàng)造生理條件。

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