ATCC細胞的說明書中有關(guān)于細胞復(fù)蘇和傳代的詳細步驟。除說明書外，還有另一份重要文件-COA（Certificate of Analysis）。COA中包含具體批次信息，如每管細胞的數(shù)量，建議復(fù)蘇使用的培養(yǎng)基用量，已知細胞的傳代代次等重要信息。
部分培養(yǎng)基如DMEM，各廠商提供產(chǎn)品雖然名稱相同，但成分也會有差異。為了保證細胞大的復(fù)蘇率和維持細胞特性，建議購買細胞的時候，同時購買ATCC細胞的培養(yǎng)基。
篩選ATCC細胞株的兩種技術(shù)介紹：
1.轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系
對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。
另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2.病毒感染篩選穩(wěn)定ATCC細胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。
您的位置：網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > ATCC細胞篩選時的常用技術(shù)講解 
QQ交談
在線交流
咨詢電話